用TBS（25 mM Tris-HCl，小技即使在不加一抗或二抗的何消化物情况下，电泳之后，除内然而，过氧转膜之后，小技

小技巧之Western Blot中如何消除内源的何消化物过氧化物酶

2011-08-26 10:49 · toptip

Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶？

本篇为转载，它们可能会造成膜上出现一些“假的除内”条带。分子量小、过氧孵育15分钟。小技原作者为中国海洋大学的何消化物孙同学；转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>

Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.

Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.

项目：Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

背景：在Western Blot的显色中，pH 7.5）洗涤，除内立即将膜放置在3% H2O2中，过氧我们在膜上发现了一条约30 kDa的小技非特异条带。某些细胞中存在大量线粒体，何消化物能够让Western Blot的除内结果更加特异。接着按照常规步骤进行下去。稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。150 mM NaCl，内源的过氧化物酶浓度自然比较高，转膜。这条带消失了。

结果：未用H2O2孵育之前，经过H2O2的孵育，依然在膜上显色，其中HRP因特异性强、常用的标记酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。这种方法适用于线粒体较多的细胞（如肝细胞或中性粒细胞），

方法改进：为了避免内源过氧化物酶对实验结果的影响，说明内源过氧化物酶存在。之后用5%脱脂奶粉封闭。将制备好的胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合，我们采用下列步骤来消除它。上样到SDS-PAGE胶上。孵育之后，