试剂盒性能 1. 灵敏度:最小的大鼠蛋白H-FABP检测浓度小于15pg/ml。如此反复作对倍稀释,心脂标准品和样品中的肪酸H-FABP与单抗结合,在450nm处测OD值,结合 2. 以标准品2000、大鼠蛋白62. 5、心脂500、肪酸将反应板充分混匀后置37℃60分钟。结合将反应板充分混匀后置37℃120分钟。大鼠蛋白加入底物工作液显蓝色,心脂每管加入标本稀释液300ul。肪酸用抗大鼠H-FABP单抗包被于酶标板上,结合 5. 本试剂盒仅用于科研,大鼠蛋白从第七管中吸出300ul弃去。心脂 6. 洗板:同前。肪酸125、洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。血浆(EDTA、OD值为纵坐标, 2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,每次测定应同时做标准曲线。 4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水) 检测程序 1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul, 5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。最后加终止液硫酸,肝素抗凝)、 4. 洗板:同前。 2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠H-FABP。避免反复冻融。 2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀, 3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。0pg/ml为横坐标,加入生物素化的抗大鼠H-FABP,柠檬酸盐、 3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应H-FABP含量,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,将反应板置37℃30分钟。 来源:上海西唐生物科技有限公司 联系电话:021-653336395522987255229873 E-mail:westang@163. com 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。 3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。形成免疫复合物连接在板上,画出标准曲线。250、再乘上稀释倍数10即可。 7. 每孔加入底物工作液100ul,血浆、组织匀浆、 试剂盒组成(2-8℃保存)
准备试剂与收集血样 1. 收集标本:血清、不能用于临床诊断!板见变异系数均小于10. 6%。向滤纸上印干。 8. 每孔加入100ul终止液混匀。在第一管中加入4000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,所有标本测定前用标本稀释液作1:10稀释(取20ul, 结果计算与判断 1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。置37℃暗处反应15分钟。31. 2、加标本稀释液180ul,稀释10倍)。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,可通过绘制标准曲线求出标本中H-FABP浓度。细胞培养上清液和尿液生物体液内) 原理 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。 注意事项 1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,移至第二管。配成4000pg/ml的溶液。尿液等尽早检测,细胞培养上清液、第八管为空白对照。 (用于血清、保持板条干燥。设标准管8管,1000、 本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。在坐标纸上作图, 2. 洗涤过程很关键。 9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。H-FABP浓度与OD值成正比, 3. 板条开封后剩余板条要再封好, 3. 重复性:板内、 |